1º Fichamento
Aplicações da Biologia Molecular na Ortodontia
1. Os avanços da biologia molecular têm contribuído significativamente para o entendimento da etiologia das doenças humanas.
2. A biologia molecular também vem apresentando aplicação bastante expressiva na pesquisa de marcadores genéticos, úteis no diagnostico de inúmeras doenças.
3. Na área odontológica, a biologia molecular tem proporcionado o diagnostico precoce da carie dental da doença periodontal e do câncer bucal.
DNA e RNA
1. Cada cromossomo consiste em duas cromátides-irmãs que são formadas por uma única fita de DNA associada a proteínas de RNA.
2. Cada cromossomo tem normalmente, a mesma sequência de genes.
3. Os genes formam uma sequência linear de cromossomos e são as unidades que determinam os traços hereditários.
4. O DNA é um polímero formado por nucleotídeos.
5. A molécula de DNA é muito longa e, se esticada pode chegar a dois metros.
6. O DNA é formado porções sem função codificante, chamadas íntrons, e porções com sequência codificadoras, denominadas éxons.
7. A molécula de DNA é constituída de duas cadeias que são mantidas unidas entre as bases nitrogenadas de nucleotídeos opostos (AT ou CG).
8. Os nucleotídeos compõem um solenóide helicoidal.
9. Cada volta do solenóide inclui cerca de seis nucleossomos.
10. Depois de hilicoidizado e condensado, o DNA atinge cerca de 1/10.000 do comprimento se fosse totalmente estendido.
11. O RNA é composto por uma única cadeia de nucleotídeos.
12. Existem três tipos de RNA: RNA mensageiro cuja função é transportar uma mensagem especifica do DNA até o citoplasma. RNA transportador, que transporta no citoplasma os aminoácidos, que se unirão para formar uma nova cadeia polipeptídica.
13. Essa ação é comanda por enzimas nucleares especificas.
14. Dessa forma, os ribossomos promovem a ligação códon versus anticódon e a aproximação dos aminoácidos em sequência que irão formar entre si, logações peptídicas, dando origem ás proteínas.
Técnicas de Biologia Molecular
1. O DNA genômico é obtido de qualquer material biológico, mas a amostras mais utilizada são sangue (leucócitos), tecido biopsiados (células resistentes), fluido amniótico e vilosidade coriônica.
2. O DNA obtido será digerido por enzimas de restrição que produzem muitos fragmentos de DNA dos genes de estudos.
3. Por exemplo, a enzima ECO RI significa enzima de restrição descoberta na Escherichia coli, linguagem R, foi a primeira enzima de restrição identificada neste organismo.
4. Essa capacidade da molécula de DNA se renaturar, reassociando-se com sua cadeia complementar e formar a dupla hélice e forma o processo de hibridação.
5. Dessa forma, uma molécula de DNA rica em pares C-G requer, para sua desnaturação uma temperatura mais alta do que uma molécula de DNA composta por pares A-T.
Eletroforese
1. A eletroforese em gel de agarose ou de poliacrinamina é um método simples e rápido que separa o DNA em fragmentos de tamanhos diferentes usando enzimas de restrição.
2. Os fragmentos menores podem se mover com maior facilidade do que os maiores, havendo, então, uma migração diferenciada dos fragmentos.
3. A PFGE permite a separação de fragmentos que variam de 50 a 10.000 Kb.
4. A PFGE pode ser aplicada para análise de grandes fragmentos de DNA, o mapeamento gênico, os cromossomos ou para detecção de grandes deleções do DNA genômico.
Métodos (métodos de Southerrn)
1. Depois de obtidos os fragmentos de DNA no gel, um certo segmento do DNA que se contem o gene de interesse pode ser pela hibridização com uma sonda especifica.
2. Quando o material presente no gel é RNA, o método chama-se Northern Blotting e, caso seja proteína, denomina-se Western Blottinhg.
3. Em seguida, é retirado o material radioativo que não se hibridizou e a membrana é exposta a um filme de raios X sensível a radioatividade.
Hibridização com Oligonucleotídeos Alelo específicos (ASO)
1. Esse método consiste no reconhecimento de um alelo particular usando-se diferentes sondas.
2. Esse método é restrito, pois é necessário conhecer a sequência de base em cada alelo para sintetizar o Oligonucleotídeos especifico para cada gene.
Reação em Cadeia Polimerase (PCR).
1. Consiste na amplificação enzimática especifica do DNA visando a produção de milhões de copias dessa sequência em um tubo de ensaio.
2. O DNA genômico a ser sintetizado é definido pelos primers, que se anelam as sequencias complementares na fita molde, delimitando o fragmento de DNA a ser amplificado.
3. A PCR tem uma ampla faixa de aplicações e pode ser utilizada para análise de mutações conhecidas, essa técnica revolucionou o estudo do câncer.
Hibridização IN SITU fluorescência (FISH)
1. O DNA cromossômico desnaturado pela exposição à formamida antes da hibridização com uma sonda apropriada.
2. Na técnica de FISH, a sonda apropriada pode ser marcada diretamente por um precursor de nucleotídeo marcado com fluorescência contendo uma molécula repórter (biotina, ou digoxigenina).
3. Essa técnica fornecer resultados rápidos que podem ser visualizados sob microscopia de fluorescência.
Aplicação da Biologia molecular na odontologia.
1. O processo da engenharia genética na medicina terá efeitos similares na pratica do cirurgião dentista.
2. Muitos métodos têm sido usados na detecção da variação fenotípica e genotípica para a caracterização dessa patogênese periodontais assim detecta bactérias da cavidade bucal.
3. A PCR é uma das técnicas mais utilizadas na identificação de patógenos associados a doença periodontal, a placa e a carie dental.
4. Será possível, também, a regeneração da perda do tecido ósseo, alveolar, de tecido gengival e de cemento, proporcionando assim, um nível de saúde periodontal.
5. A genética do câncer tem se desenvolvido devido aos avanços nas técnicas de biologia molecular e de imunohistoquímica.
6. Os genes do câncer são classificados em três categorias; as que inibem a ploriferação celular, (supressores tumorais) e os que participam do reparo do DNA e do apoptose.
7. Os genes supressores tumorais têm a propriedade de bloquear a proliferação celular descontrolada.
8. Os genes supressores tumorais apresentam mutações na linhagem germinativa que causam síndromes de câncer herdado, como o retinoblastoma (Rb).
9. O oncogene é o resultado de uma mutação em um proto-oncogene, que são dominantes em nível celular, apenas uma única cópia de um oncogene é necessária para a progressão tumoral.
10. Tem se evidenciado que genes específicos estão alterados no câncer bucal.
11. A maioria desregulado no câncer bucal está associada a ploriferação celular.
12. O gene PS3 é considerado um supressor tumoral, as mutações que nele ocorrem podem ocasionar uma perda de função.
13. O gene PS3 é importante por dois motivos: primeiro, porque sua presença geralmente indica tumores mais agressivos, com chance de sobrevida baixa. Segundo, porque ele é importante na prevenção do tumor.
14. Os avanços referentes a conceitos, mecanismos e técnicas de identificação, são importantes como auxiliar no diagnostico e no prognostico dos cânceres humanos.
15. A apoptose é ativada por substancias e genes envolvidos na homeostase das células normais, bem como alterações patológicas especificas do câncer.
16. Os cancionomas espinocelulares na cavidade bucal constituem a maior proporção de cânceres de cabeça e pescoço e umas das principais causas de morbidade e mortalidade mundial.
17. De acordo com Sandra ET AL, há relação que evidenciam a expressão das proteínas PS3 e mdm2, não só em tumores malignos e benignos nas regiões bucais e maxilofaciais como também em lesões odontogênicas.
18. A expressão da PS3 foi mais elevada nos tumores com pobre diferenciação celular e em pacientes jovens.
19. O leiomiossarcoma é um tumor muito raro da cavidade bucal, e apresentado dificuldade de identificação histopatológica entre tumor maligno e benigno.
20. A seleção dos anticorpos para esse teste é feita com base na especificidade do tumor e se o anticorpo provavelmente irá reagir com o tumor sob avaliação.
21. Nesta revisão, encontramos técnicas para a identificação molecular de doenças humanas e suas aplicações na odontologia.
